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小菜蛾抗菌肽聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒的制备及体外评价

2015/6/25 9:43:38      点击:

纳米给药系统具有降低药物毒性和刺激性、延缓药物降解、延长药物释放时间、靶向释放等优点,将药物包封于其中,可实现调节药物释放速率,改变药物在体内的分布、提高药物生物利用度等目的,具有巨大的应用前景。目前,可生物降解的合成聚合物材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物,PLGA由于其无毒、成球性好、化学稳定性高、具有控制释放能力等特点被广泛用作纳米给药系统的载体。

本研究选用PLGA为载体材料,CA为模型药物,以S/W/O/W结合高压均质法制备小菜蛾抗菌肽PLGA纳米粒(CA-PLGA-NPs),通过正交试验,以2、6、14d累积释放率为评价指标对处方工艺进行优化筛选,对其粒径、多分散指数(PDI)、电位等理化性质进行表征,以透射电镜(TEM)观察其基本形态,并对其进行体外释药行为考察。

仪器与材料

Agilent1100高效液相色谱仪,含在线脱气机、四元梯度泵、自动进样器、DAD检测器、HPChemstation化学工作站,Agilent公司;S-4800扫描电镜,日本日立;NanoZS90激光粒径分析仪苏州微流纳米生物技术有限公司;JS94W温控型Zeta电位测量仪,北京中仪科信科技有限公司;高压均质机,苏州微流纳米生物技术有限公司;JHBE-20A高速探头超声仪,河南金鼐科技发展有限公司;旋转蒸发仪,上海医械专机厂;冷冻干燥机,美国Labconco公司。

方法与结果

取0.5gCA,PEG2000与HP-β-CD的等比例混合物加入到去离子水溶液中,冷冻干燥得到CA的多肽微粉。将含有50mgCA的多肽微粉加入到20mLPLGA的二氯甲烷中,高压乳均,充分乳化后加入含氯化钠的PVA溶液200mL,高速探头超声5min,将其加入到高压均质机中高压均质(100.0MPa)循环5次,得复乳,减压旋转除去有机溶剂,高速离心取沉淀后蒸馏水洗涤3次,收集纳米粒,加入3%甘露醇,冷冻干燥(−50℃、10Pa),即得。

HPLC法测定CA方法建立;对照品溶液的制备;供试品溶液的制备;线性关系考察;精密度试验;重复性试验;稳定性试验;加样回收率试验;体外释放度测定;制备工艺的优选;CA微粉分散于CA-PLGA-NPs的网状结构内部,形成了许多储药小室,这些小室不仅能防止CA的大量聚集,也能避免CA长时间与外界环境的接触,从而提高CA的稳定性,增加其体内的半衰期。

讨论

在本制剂处方中选用等比例的 PEG2000与羟丙基-β-环糊精的混合物作为保护剂,在制备初乳时,保护剂迅速进入初乳的水相液滴内部,从而减少CA与二氯甲烷的接触时间。同时,PEG2000能减小乳滴的油相与水相表面张力,减少乳滴破裂从而保护水滴中的CA分子。PLGA用量对CA-PLGANPs理化性质影响较小。由于对流体的粘度有一定的要求,本实验中PLGA的最大质量浓度设定在30mg/mL。溶液黏度过大将降低高压均质机的工作性能,实验结果表明,10mg/mL的PLGA能满足本处方的要求。处方中的氯化钠不仅能提高外水相的渗透压,防止因内水相压力过大而破乳,也能加速内水相的水分子向外迁移,提高包封率,还能使CA-PLGA-NPs更加致密,延长释药时间。PVA常作为表面活性剂用于CA-PLGA-NPs的制备,其质量分数对CA-PLGA-NPs的制备影响较小,提高PVA的质量分数能增加初乳的稳定性,从而减少CA的泄漏,达到提高包封率、减少突释的效果。通过本研究采用S/W/O/W结合高压均质法制备的CA-PLGA-NPs粒径较小且均一,工艺稳定可行,为抗菌肽类药物的新型给药系统研究提供制剂学基础。