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高压均质机制备毛萼乙素纳米混悬剂

2015/9/28 15:55:10      点击:

毛萼乙素(eriocalyxin B,1)是从疏花毛萼香茶菜中提取分离得到的贝壳杉烷二萜类化合物,为抗肿瘤药冬凌草甲素的类似物。体外抗肿瘤活性测试表明,eriocalyxin B有广谱抑瘤作用,对卵巢癌、乳腺癌、宫颈癌、肠癌、肺癌、胃癌、肝癌、前列腺癌及白血病等肿瘤细胞均具有显著的增殖抑制作用;小鼠体内试验结果也呈现出较好的抗肿瘤作用,显示出良好的药用开发前景。但由于1溶解性差,在水中的饱和溶解度约为0.11 mg/ml,在正辛醇-水体系中的表观油水分配系数(lgPapp)约为2,在制剂研究中存在一定的困难。采用纳米药物晶体技术(drug nanocrystal technology)制备药物纳米混悬剂(nanosuspension),可解决几乎所有难溶性药物的溶解度和溶出度问题。该技术无需载体材料,处方简单,可制得高浓度的药物制剂。并且在对活性化合物进行筛选时可摒除附加剂造成的不良反应,提高筛选效率。因此,本研究结合介质研磨法和高压均质法制备了纳米混悬剂。

仪器与材料

LC-10A型高效液相色谱仪;LS-230型激光散射粒度测定仪;高压均质机

原药;卵磷脂;泊洛沙姆;叔丁基甲醚;氧化锆珠;注射用生理盐水;四氢呋喃和甲醇为色谱纯,其他试剂为分析纯。

实验过程

1.取卵磷脂0.15g、泊洛沙姆0.1 g,置一小杯中,加入注射用生理盐水50ml分散,然后加入10.5g、氧化锆珠25ml。开动搅拌,搅拌转速逐渐提高至2000r/min,室温搅拌2h后,过200目筛分取药液,移至高压均质机中,5000psi循环5次,10 000 psi循环5次,20000psi循环10次,得毛萼乙素(eriocalyxin B)纳米混悬剂。

2.色谱柱 Inertsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相等甲醇-水(65∶35,含0.1%三乙胺,用磷酸调至pH 6.8);检测波长 233nm;柱温35℃;流速1.0ml/min;进样量20μl。

3.精密称取1原药15mg,置25ml量瓶中,加甲醇溶解并定容,混匀,作为贮备液。精密量取贮备液适量,加甲醇稀释得1浓度分别为0.5、1、1.5、2.5、5和10μg/ml的溶液。分别进样测定,记录色谱图。以峰面积(A)为纵坐标,以1浓度(c)为横坐标进行线性回归,得标准曲线方程A=53 784c-2 141.8(r=0.999 9)。表明1在0.5~10 μg/ml浓度范围内线性关系良好。最低检测限为5ng/ml。

结果

介质研磨法和高压均质机均质法是制备纳米混悬剂的常用方法。将两法联用制备1纳米混悬剂。纳米粒的粒径除与药物性质有关外,还受研磨介质的性质(材质、硬度和粒径)、搅拌转速、稳定剂、均质压力和次数等因素的影响。

讨论

以F68和卵磷脂为稳定剂,采用高硬度小粒径(0.5mm)的氧化锆珠进行研磨,再经高压均质机均质作用进一步减小和匀化粒径,得到数均粒径为98.2nm的纳米混悬剂,可用于1的药动学和药效学研究。