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新型载水飞蓟宾热敏脂质体-微泡Sono Vue复合体制备及质量分析

2015/7/1 15:55:09      点击:

水飞蓟宾是具有抗炎抗氧化的保肝药物,同时能够显著改变肿瘤炎性微环境,从而抑制肿瘤生长。如能实现靶向递药,将有可能提高其吸收与利用率。超声造影微泡可在一定声强的局部声场中爆破,实现靶区血管内皮系统开放,促进药物进入组织间隙。热敏脂质体可在一定温度下释放药物,实现局部给药。本研究拟将这两者的特性相结合,研制新的热敏脂质体-微泡Sono Vue复合体载药体系,加强药物的组织渗透力和靶向性,实现局部释药控制。

材料与仪器

单棕榈酰磷脂酰胆碱,二棕榈酰磷脂酰胆碱,二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基;水飞蓟宾(中国药品生物制品检定所);聚乙酸滤膜;超声造影剂微泡;无水乙醇、戊二醛、磷酸二氢钠(西安科昊生物工程有限公司);透射电镜;激光粒度仪;HALO DB-20R双光束紫外-可见分光光度计;激光共聚焦显微镜。

载水飞蓟宾热敏脂质体的制备以旋蒸法制备薄膜,称取DPPC30mg,MPPC3mg,DSPE-mPEG 2000Amine 5mg,水飞蓟宾2mg溶于适量无水乙醇,于旋转薄膜蒸发仪中抽真空旋转蒸发制备薄膜。以磷酸盐缓冲液(pH2.7)溶解薄膜,超声分散,然后过微孔滤膜(0.8、0.4、0.2μm)各2次,得载药热敏脂质体。采用平衡透析法,以磷酸盐缓冲液为透析液,每8h换液1次,透析48h,去除游离药物。载水飞蓟宾热敏脂质体-微泡复合体制备,粒径检测及形态观察,激光粒度仪检测载药脂质体及载药脂质体-微泡复合体粒径大小。将样品滴在有支持膜的铜网上,用磷钨酸进行负染,观察载药脂质体及脂质体-微泡复合体的形态结构。包封率检测,检测波长的确定 取水飞蓟宾对照品溶液,以无水乙醇充分溶解,采用紫外分光光度计于进行全波长扫描。水飞蓟宾热敏脂质体包封率测定方法的建立精密吸取制备好的水飞蓟宾热敏脂质体溶液1ml,用无水乙醇定容至10ml,依法测定得到溶液中全部所含药量A1。采用透析法,将1ml制备好的水飞蓟宾脂质体溶液置入透析袋中,以磷酸盐缓冲液进行透析48h,取透析袋中水飞蓟宾脂质体1ml,无水乙醇稀释至10ml,测定得到包含在脂质体中的含药量A2。

结果

热敏脂质体粒径检测,电镜下观察载水飞蓟宾热敏脂质体为小单室脂质体,激光粒度仪测量平均粒径(122.3±53.1)nm,载水飞蓟宾热敏脂质体-微泡复合体平均粒径(2724±559.9)nm。水飞蓟宾热敏脂质体-微泡复合体的体外温控释药性。热敏脂质体-微泡复合体偶联效率。

讨论

超声引导下热消融治疗肿瘤技术,如射频、微波及高强度聚焦超声等,通过使得靶区温度迅速升到60℃以上,造成局部组织蛋白凝固而导致肿瘤坏死。但是因为组织内血供及肿瘤位置的影响,局部温度有可能降低形成亚高温场(40~60℃),可能导致肿瘤残留。如能利用这一亚高温场,通过药物载体,实现局部靶向药物释放,将会对降低肿瘤残留,提高消融疗效有重要意义。

热敏脂质体可在一定温度下释放药物,具有较好的温控特性。超声造影剂微泡可在一定场强的超声波下爆破产生空化效应,打开局部血管内皮屏障。本研究将热敏脂质体与微泡相结合,以期利用微泡的靶向爆破和热敏脂质体的局部温控效应建立新的药物载体,在提高局部药物浓度。

本研究采用DPPC和MPPC作为制备热敏脂质体的主材,在41℃以上达到较高释放率,能够满足在亚高温场的药物释放需求。在热敏脂质体的制备过程中,粒径的控制非常重要,通过探头超声及薄膜挤压的方法使脂质体粒径缩小到需要的尺寸。在制备的过程中,热敏脂质体在PBS中水化的时间影响到其分散,刚刚制备的热敏脂质体溶液可能会出现分层。水化时间越长,分散得越均匀。脂质体与微泡相连接的方法有很多。国内王红红等采用生物素亲和素系统连接超声微泡及阳离子纳米脂质体, 翁慧芳等采用戊二醛交联法将Sono Vue与脂质体相连接,均取得较高的偶联效率。在前期研究基础上,笔者采用戊二醛交联法,使戊二醛的醛基分别和热敏脂质体的氨基及微泡上的氨基相连,从而使得热敏脂质体与微泡相结合。共聚焦显微镜结果显示取得了较好的偶联率,为进一步在体研究药物释放靶向性奠定了基础。结合热敏脂质体及微泡的靶向特性,制备载水飞蓟宾热敏脂质体-微泡的复合体,具有较好的偶联率、药物包封率和温度控释性,可成为靶向药物递送的一种新载体。